V bioloških raziskavah se običajno uporabljajo polipeptidi z dolgim zaporedjem.Za peptide z več kot 60 aminokislinami v zaporedju se za njihovo pridobitev običajno uporabljata genska ekspresija in SDS-PAGE.Vendar ta metoda traja dolgo časa in končni učinek ločevanja produkta ni dober.
Izzivi in rešitve za dolgo sintezo peptidov
Pri sintezi dolgih peptidov se vedno srečujemo s problemom, in sicer se sterična ovira kondenzacijske reakcije povečuje z večanjem zaporedja v sintezi in je treba prilagoditi reakcijski čas, da je reakcija popolna.Daljši kot je reakcijski čas, več stranskih učinkov nastane in nastane del ciljnega peptida.Takšni ostanki – pomanjkljive peptidne verige so ključne nečistoče, ki nastanejo pri dolgi peptidni sintezi.Zato je pri sintezi dolgega peptida ključna težava, ki jo moramo premagati, raziskovanje visokokakovostnih reakcijskih pogojev in reakcijskih metod, da bi bila reakcija kondenzacije aminokislin bolj celovita in popolna.Poleg tega zmanjšajte reakcijski čas, kajti daljši ko je reakcijski čas, več je neobvladljivih stranskih reakcij, bolj kompleksni so stranski produkti.Zato so povzete naslednje tri točke:
Mikrovalovna sinteza se lahko uporablja: Za nekatere aminokisline, ki se pojavijo v procesu sinteze in jih ni enostavno integrirati, je mogoče uporabiti mikrovalovno sintezo.Ta metoda ima izjemne rezultate in močno skrajša reakcijski čas ter zmanjša nastajanje dveh ključnih stranskih produktov.
Lahko se uporabi metoda sinteze fragmentov: Ko je nekatere peptide težko sintetizirati z običajnimi metodami sinteze in jih ni enostavno očistiti, lahko sprejmemo celotno kondenzacijo več aminokislin v določenem segmentu peptida v peptidno verigo kot celoto.Ta metoda lahko reši tudi številne probleme pri sintezi.
Lahko se uporabi sinteza acilhidrazida: acilhidrazidna sinteza peptidov je metoda trdne faze sinteze N-terminalnega Cys peptida in C-terminalnega polipeptidnega hidrazidnega kemijske selektivne reakcije med tvorbo amidnih vezi za doseganje metode peptidne vezi.Na podlagi položaja Cys v peptidni verigi ta metoda razdeli celotno peptidno verigo na več sekvenc in jih sintetizira.Končno se ciljni peptid pridobi z reakcijo kondenzacije v tekoči fazi.Ta metoda ne le močno skrajša čas sinteze dolgega peptida, ampak tudi znatno poveča čistost končnega produkta.
Dolgo čiščenje peptidov
Posebnost dolgih peptidov neizogibno vodi do kompleksnih komponent surovih peptidov.Zato je tudi čiščenje dolgih peptidov s HPLC izziv.amiloidna serija postopka čiščenja polipeptidov, ki absorbira veliko izkušenj in se uspešno uporablja pri čiščenju dolgih peptidov.S sprejetjem nove opreme, mešanjem več čistilnih sistemov, ponavljajočim se ločevanjem in drugimi izkušnjami se je stopnja uspešnosti dolgega čiščenja peptidov močno izboljšala.
Čas objave: 18. aprila 2023