Rekombinantni proteinski antigeni imajo pogosto več različnih epitopov, od katerih so nekateri epitopi zaporedja, nekateri pa strukturni epitopi.Poliklonska protitelesa, pridobljena z imunizacijo živali z denaturiranimi antigeni, so mešanice protiteles, specifičnih za posamezne epitope, in jih je mogoče na splošno uporabiti za odkrivanje naravnih struktur ali denaturiranih tarčnih proteinov.Stranska prednost uporabe denaturiranih beljakovin kot imunogenov je, da so denaturirane beljakovine ponavadi bolj imunogene in lahko spodbudijo močan imunski odziv pri živalih.
Ekspresijski sistem Escherichia coli se običajno izbere za antigenske namene, ker je časovno in denarno najdražji sistem.Da bi izboljšali možnost izražanja ciljnega proteina in udobje čiščenja, se včasih izrazi le majhen fragment ciljnega proteina, kot je specifična domena.
Tridimenzionalna struktura proteinov
Specifična domena beljakovine
Če je namen priprave protiteles izključno odkrivanje wb, je ekonomično in hitro uporabiti sintetični majhen peptid kot antigen, vendar obstaja tveganje šibke imunogenosti ali neregenosti zaradi neustrezne izbire peptidnega segmenta.Ker priprava protiteles zahteva dolgo obdobje, se pogosto izberejo dva ali trije različni peptidni segmenti za pripravo protiteles z uporabo polipeptidnega antigena, da se zagotovi stopnja uspešnosti poskusa.
Čistost polipeptidnega antigena za imunizacijo mora biti večja od 80 %.Čeprav je z višjo čistostjo teoretično mogoče dobiti protitelesa z boljšo specifičnostjo, v praksi živali vedno proizvedejo veliko število nespecifičnih protiteles in tako prikrijejo prednosti čistosti antigena.
Poleg tega mora biti pripravek protiteles iz majhnih peptidov navzkrižno povezan z ustreznim nosilnim antigenom, da se poveča njegova imunogenost.Dva pogosta nosilca antigenov sta KLH in BSA.
Čas objave: 23. marec 2023