Najbolj nagnjeni k napakam in rešitvam HPLC

Kot zelo natančen instrument lahko HPLC zlahka povzroči nekaj motečih majhnih težav, če se med uporabo ne upravlja na pravilen način.Ena najpogostejših težav je stiskanje stolpcev.Kako hitro odpraviti napako na kromatografu.Sistem HPLC je v glavnem sestavljen iz steklenice z rezervoarjem, črpalke, injektorja, kolone, temperaturne komore kolone, detektorja in sistema za obdelavo podatkov.Za celoten sistem so stebri, črpalke in detektorji ključne komponente in glavne lokacije, ki so nagnjene k težavam.

Ključ do tlaka v koloni je področje, ki mu je pri uporabi HPLC potrebna posebna pozornost.Stabilnost kolonskega tlaka je tesno povezana z obliko kromatografskega vrha, učinkovitostjo kolone, učinkovitostjo ločevanja in retencijskim časom.Stabilnost tlaka v koloni ne pomeni, da je vrednost tlaka stabilna pri stabilni vrednosti, temveč da je območje nihanja tlaka med 345 kPa ali 50 PSI (kar omogoča uporabo gradientne elucije, ko je tlak v koloni stabilen in se počasi spreminja).Previsok ali prenizek tlak je problem tlaka v stolpcu.

Najbolj nagnjeni k napakam in rešitvam HPLC

1 je visok tlak najpogostejša težava pri uporabi HPLC.To pomeni nenaden dvig pritiska.Na splošno obstajajo naslednji razlogi: (1) Na splošno je to posledica blokade pretočnega kanala.Na tej točki bi ga morali pregledati po delih.a.Najprej odrežite dovod vakuumske črpalke.Na tej točki je bila cev PEEK napolnjena s tekočino, tako da je bila cev PEEK manjša od steklenice s topilom, da bi videli, ali tekočina kaplja po mili volji.Če tekočina ne kaplja ali kaplja počasi, je glava filtra za topilo zamašena.Zdravljenje: Namočite v 30% dušikovo kislino za pol ure in sperite z ultra čisto vodo.Če tekočina naključno kaplja, je glava filtra za topilo normalna in se preverja;b.Odprite odzračevalni ventil, da mobilna faza ne gre skozi kolono, in če se tlak ne zmanjša bistveno, je bela glava filtra blokirana.Zdravljenje: Filtrirane bele glave smo odstranili in jih pol ure obdelovali z ultrazvokom z 10 % izopropanolom.Ob predpostavki, da tlak pade pod 100 PSI, je filtrirana bela glava normalna in se preverja;c.Odstranite izhodni konec kolone, če se tlak ne zmanjša, je kolona blokirana.Zdravljenje: Če gre za blokado puferske soli, izpirajte 95 %, dokler tlak ni normalen.Če oviro povzroči kakšen bolj ohranjen material, je treba uporabiti močnejši tok od trenutne mobilne faze, da se pospeši proti normalnemu tlaku.Če se dolgotrajni čistilni tlak ne zmanjša v skladu z zgornjo metodo, se lahko šteje, da sta vhod in izhod kolone povezana z instrumentom, nasprotno, kolono pa je mogoče očistiti z mobilno fazo.V tem času, če se tlak kolone še vedno ne zmanjša, je mogoče le zamenjati vstopno sito ploščo kolone, ko pa delovanje ni dobro, je enostavno privesti do zmanjšanja učinka kolone, zato poskusite uporabiti manj.Pri težavnih težavah pride v poštev zamenjava stolpca.

(2) Nepravilna nastavitev pretoka: Pravilen pretok je mogoče ponastaviti.

(3) Nepravilno pretočno razmerje: indeks viskoznosti različnih deležev tokov je drugačen, večji pa je tudi ustrezni sistemski tlak pretoka z višjo viskoznostjo.Če je mogoče, lahko topila z nižjo viskoznostjo zamenjate ali ponovno nastavite in pripravite.

(4) Premik ničelnega tlaka v sistemu: prilagodite ničlo senzorja nivoja tekočine.

2, je tlak prenizek (1) običajno posledica puščanja sistema.Kaj storiti: Poiščite vsako povezavo, zlasti vmesnik na obeh koncih stebra, in zategnite območje puščanja.Odstranite drog in zategnite ali obložite PTFE folijo z ustrezno silo.

(2) Plin vstopi v črpalko, vendar je tlak v tem času običajno nestabilen, visok ali nizek.Še resneje, črpalka ne bo mogla absorbirati tekočine.Metoda obdelave: odprite čistilni ventil in očistite s pretokom 3~5 ml/min.V nasprotnem primeru so bili zračni mehurčki aspirirani na izpušnem ventilu z uporabo namenske igelne cevi.

(3) Ni odtoka mobilne faze: preverite, ali je v steklenici z rezervoarjem mobilna faza, ali je korito potopljeno v mobilno fazo in ali črpalka deluje.

(4) Referenčni ventil ni zaprt: referenčni ventil je zaprt po pojemku.Ponavadi se zniža na 0,1.~ 0,2 ml/min po zaprtju referenčnega ventila.

Povzetek:

V tem prispevku so analizirani samo pogosti problemi v tekočinski kromatografiji.Seveda bomo pri naši praktični uporabi naleteli na več drugih težav.Pri obravnavanju napak bi morali slediti naslednjim načelom: spreminjati samo en dejavnik naenkrat, da bi določili razmerje med hipotetičnim dejavnikom in problemom;Na splošno moramo pri zamenjavi delov za odpravljanje težav paziti, da nepoškodovane dele postavimo nazaj na svoje mesto, da preprečimo odpadke;Oblikovanje dobre navade zapisovanja je ključ do uspeha obravnave napak.Skratka, pri uporabi HPLC je pomembno posvetiti pozornost predobdelavi vzorca ter pravilnemu delovanju in vzdrževanju opreme.