Fluorescenčni resonančni prenos energije (FRET)
Fluorescenčni resonančni prenos energije (FRET) je proces prenosa energije brez sevanja, pri katerem se energija vzbujenega stanja donorjev prenese v vzbujeno stanje akceptorjev z interakcijo medmolekularnih električnih parov.Ta proces ne vključuje fotonov in je zato brez sevanja.Prednost tega testa je, da je hiter, občutljiv in preprost.
Barvilo, uporabljeno v testu FRET, je lahko enako.Toda v večini aplikacij se dejansko uporabljajo različna barvila.Na kratko, prenos svetlobne resonančne energije je prenos para dipolov od donorja (barvilo 1) do akceptorja (barvilo 2), ko je donorska skupina vzbujena.Na splošno se emisijski spekter donorske fluoroforne skupine prekriva z absorpcijskim spektrom akceptorske skupine."Ko je razdalja med obema fluoroforjema ustrezna (10 - 100 A), je mogoče opaziti prenos energije fluoroforja od darovalca do akceptorja."Način prenosa energije je odvisen od kemijske zgradbe receptorja:
1. Se pretvori v molekularno vibracijo, kar pomeni, da svetlobna svetloba prenosa energije izgine.(Receptor je dušilec svetlobe)
2. Emisija je intenzivnejša od samega receptorja, kar ima za posledico rdeči premik v sekundarnem fluorescenčnem spektru.«(Receptorji so oddajniki svetlobe).
Donorska skupina (EDANS) in akceptorski gen (DABCYL) sta enakomerno povezana z naravnim substratom HIV proteaze, in ko substrat ni odklopljen, lahko DABCYL duši EDANS in postane nezaznaven za fluor.Po prekinitvi povezave s proteazo HIV-1 DABCYL ne duši več EDANS, zato je mogoče zaznati luciferaze EDANS.Razpoložljivost zaviralcev proteaz je mogoče spremljati s spremembami intenzivnosti fluorescence EDANS.
Peptidi FRET so priročno orodje za preučevanje nespecifičnosti peptidaze.Ker je njegov reakcijski proces mogoče nenehno spremljati, zagotavlja priročno metodo za odkrivanje encimske aktivnosti.Sijaj, ki nastane po hidrolizi peptidnih vezi s strani donorja/akceptorja, zagotavlja merilo encimske aktivnosti pri nanomolarnih koncentracijah.Ko je peptid FRET nedotaknjen, kaže nenadno izginotje notranjega bliska, ko pa se katera koli peptidna vez nasproti donorja/akceptorja prekine, sprosti blisk, ki ga je mogoče neprekinjeno zaznati in nato kvantificirati aktivnost encima.
Čas objave: 14. avgusta 2023